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人 血管生成素1ELISA試劑盒

提供者:上海瑞番生物科技有限公司   發布時間:2019/7/22  閱讀次數:187次   進入該公司展台

 人 血管生成素1 (ANGPT1 ) 酶聯免疫 分析
試劑 盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測範圍 : 96T
150ng/L - 4800ng/L
使用目的 :
本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關液體樣本中血管生成素 1(ANGPT1)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人血管生成素 1(ANGPT1)水平。用純化的人
血管生成素 1(ANGPT1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入
血管生成素 1(ANGPT1),再與 HRP 標記的血管生成素 1(ANGPT1)抗體結合,形成抗
體-抗原-酶標抗體複合物,經過徹底洗滌後加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉
化成藍色,並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顔色的深淺和樣品中的血管生成素 1
(ANGPT1)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標准曲線計
算樣品中人血管生成素 1(ANGPT1)濃度。
試劑盒組成
1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1 瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標試劑  6ml×1 瓶  8  標准品(9600ng/L)  0.5ml×1 瓶
3  酶標包被板  12 孔×8 條  9  標准品稀釋液  1.5ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  10  說明書  1 份
5  顯色劑 A 液  6ml×1 瓶  11  封板膜  2 張
6  顯色劑 B 液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個
標本 要求
1.標本采集後盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取後應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反複凍融
2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.  標准品的稀釋:本試劑盒提供原倍標准品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
4800ng/L  5 號標准品  150µl 的原倍標准品加入 150µl 標准品稀釋液
2400ng/L  4 號標准品  150µl 的 5 號標准品加入 150µl 標准品稀釋液
1200ng/L  3 號標准品  150µl 的 4 號標准品加入 150µl 標准品稀釋液
600ng/L  2 號標准品  150µl 的 3 號標准品加入 150µl 標准品稀釋液
300ng/L  1 號標准品  150µl 的 2 號標准品加入 150µl 標准品稀釋液
2.  加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標准孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標准品准確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,
然後再加待測樣品 10µl(樣品最終稀釋度爲 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.  溫育:用封板膜封板後置 37℃溫育 30 分鍾。
4.  配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋後備用
5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩幹,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒後棄去,如此
重複 5 次,拍幹。
6.  加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。
7.  溫育:操作同 3。
8.  洗滌:操作同 5。
9.  顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
10 分鍾.
10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止
液後 15 分鍾以內進行。
操作程序總結 :
計算
以標准物的濃度爲橫坐標,OD 值爲縱坐標,在坐標紙上繪出標准曲線,根據樣品的
OD 值由標准曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標准物的濃度與 OD 值計算出標
准曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,
即爲樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鍾後方可使用,酶標包被板開封後如未
用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,並經常校對其准確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好
控制在 5 分鍾內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標准曲線,最好做複孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD 值
大于標准品孔第一孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)後再測定,計
算時請最後乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉汙染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數爲准.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個月
 

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