請登錄 免費注冊 忘記密碼
官方微信

手機版

資料中心

您現在的位置::首頁>資料下載>應用方法>小鼠β-連環蛋白(β-catenin)ELISA試劑盒使用說明書

小鼠β-連環蛋白(β-catenin)ELISA試劑盒使用說明書

  • 所屬分類:應用方法

    上傳時間:2017/10/10

  • 文件類型:jpg

    文件大小:45 KB

  • 浏覽次數:3831次

    下載次數:425次

    需要積分:0積分

  • 上傳公司:南京森貝伽生物科技有限公司進入展台
  • 標簽:

資料簡介

小鼠β-連環蛋白(β-catenin)ELISA試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定小鼠血清,血漿及相關液體樣本中小鼠β-連環蛋白(β-catenin)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本小鼠β-連環蛋白(β-catenin水平。用純化的小鼠β-連環蛋白(β-catenin抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入β-連環蛋白(β-catenin),再與HRP標記的羊抗鼠抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體複合物,經過徹底洗滌後底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顔色的深淺和樣品中的β-連環蛋白(β-catenin呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標准曲線計算樣品小鼠β-連環蛋白(β-catenin濃度。

試劑盒組成

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

標准品:270pg/ml

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

標准品稀釋液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8℃保存

酶標試劑

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

樣品稀釋液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

20倍濃縮洗滌液

20ml×1

30ml×1

2-8℃保存

 

樣本處理及要求

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鍾,離心20分鍾左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉澱,應再次離心。

2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作爲抗凝劑,混合10-20分鍾後,離心20分鍾左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉澱形成,應該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鍾左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉澱形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鍾左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100/ml左右。通過反複凍融,以使細胞破壞並放出細胞內成份。離心20分鍾左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成,應再次離心。

5. 組織標本:切割標本後,稱取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鍾左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。分裝後一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標本采集後盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但避免反複凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 標准品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標准品孔10孔,在第一、第二孔中分別加標准品100μl,然後在第一、第二孔中加標准品稀釋液50μl,混勻;然後從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標准品稀釋液50μl,混勻;然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標准品稀釋液50ul,混勻;混勻後從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標准品稀釋液50μl,混勻後從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標准品稀釋液50μl,混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋後各孔加樣量都爲50μl,濃度分別爲180pg/ml120pg/ml 60pg/ml30pg/ml 15pg/ml)。

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然後再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度爲5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻

3. 溫育:用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾

4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋後備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩幹,每孔加滿洗滌液,靜置30秒後棄去,如此重複5次,拍幹。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外

7. 溫育:操作同3

8. 洗滌:操作同5

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鍾. 

10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)

11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應在加終止液後15分鍾以內進行。

注意事項:

1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後方可使用,酶標包被板開封後如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3. 各步加樣均應使用加樣器,並經常校對其准確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鍾內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標准曲線,最好做複孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標准品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)後再測定,計算時請最後乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉汙染。

6. 底物請避光保存。

7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數爲准.

8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9. 本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書爲准。


計算

以標准物的濃度爲橫坐標,OD值爲縱坐標,    

在坐標紙上繪出標准曲線,根據樣品的OD      

值由標准曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋      

倍數;或用標准物的濃度與OD值計算出標      

准曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD      

代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋      

倍數,即爲樣品的實際濃度。                  

標准曲線圖   
(此圖僅供參考) 

 

試劑盒性能:

1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值爲0.990以上。

2.批內與批見應分別小于9%11%

 

檢測範圍:                                              

10pg/ml - 200pg/ml                                         

                            

保存條件及有效期:

1.試劑盒保存:2-8

2.有效期:6個月

優質産品

更多>>
優質信息推廣廣告

頻道

色譜儀 光譜儀 反應釜 試驗箱 試驗機 攪拌器 培養箱 離心機 水分測定 氣體檢測 量熱儀 顯微鏡 純水器 電化學 溫度記錄 壓力儀表 電線電纜 傳感器

流量計 元素分析 生物試劑 比表面儀 粉體設備 測厚儀 藥物檢測 幹燥設備 天平衡器 硬度計 酸度計 萬用表 石油儀器 閥門儀表 泵 食品檢測 電力儀表